코스모폴리턴에 등장하는 조직. 이름에서 알 수 있듯이, 근거지는 트와일라이트 시티이다.

트와일라이트 시티와 그 인근에서 가장 강력한 조직들 중 하나로, 인근 마피아들 중에선 가장 강하다. 뉴욕 마피아와 비슷하게 거대한 패밀리 몇 개가 주도권을 쥐고 있고, 그 산하에 수많은 조직들이 늘어서 있다. 5대 패밀리가 대부분 성스러운 이름을 지녔다는 것이 특이사항.[1]

대중매체에서 등장하는 마피아와 똑같다. 시대 배경이 현대인지라 소설 '대부' 시리즈 같은 낭만은 더 이상 없고 권력암투와 배신이 난립하고 있다. 물론 해당 시리즈 같은 전통과 로망(?)을 간직한 조직이 없는 것은 아니지만 시대착오적인 취급을 받고 있다. 게다가 케이스에 따라 청년급이 조직의 두목이 되다 보니 마피아란 이름을 달고 양아치 집단처럼 보이는 부류도 있다.

※ 세력에 관계없이 가나다 순으로 표기한다.

• 모나스테로 패밀리(Monastero Family)
  5대 패밀리 중 가장 조용하고 평화로운 조직. 내부 관리가 좋아 대부분의 조직원들이 선호하는 조직이다. 이게 다 그들이 5대 패밀리 중에서 정치권과 가장 커넥션이 튼튼하기 때문이다. 하지만 그렇기 때문에 큰 힘을 발휘하지는 못한다.
  
  
• 브루네티 패밀리(Brunetti Family)
  자카리아 패밀리와 함께 저평가되는 조직. 매춘과 포르노 등 비아냥을 사기 좋은 사업들을 끼고 있어서 그렇다고. 물론 5대 패밀리가 전부 관여하고 있는 마약사업에 비하면 양반이다. 최근에 금융사기라는 새로운 사업을 발굴하여 역전을 노리고 있다.
  
  
• 사마리아노 패밀리(Samariano Family)
  이름과 달리 5대 패밀리 중 전투종족들이 가장 많이 모인 조직으로 평가받고 있다. 혹자가 평하길, '받은 만큼 돌려주는 놈들'이라고. 이 때문에 과거에 있었던 내외부 전쟁에 모두 끼어 있었다.
  
  
• 삽바티니 패밀리(Sabbatini Family)
  사마리아노 패밀리만큼은 아니지만, 둘째가라면 서러울 만큼 역시 강자들이 모인 조직. 역시 이름 탓인지 유대계 마피아와 커넥션이 많아 자금줄이 제법 튼튼한 편이다.
  
  
• 자카리아 패밀리(Zaccaria Family)
  브루네티 패밀리와 함께 함께 저평가되는 조직. 이쪽은 반대로 합법사업을 너무 많이 끼고 있어서 오히려 마피아답지 않다는 이유로 욕을 먹고 있다. 하지만 그 합법사업을 통해 돈세탁을 담당하고 있기 때문에, 사실 자금력만 놓고 보면 삽바티니 패밀리를 능가하는 게 아니냐는 추정이 있다.
  

• 그리지오 패밀리(Grigio Family)/브루네티 패밀리
  프로젝트가 프라임 시티였을 때부터 살아남은 조직. 이게 다 패러디 원본 때문이다. 브루네티의 무력을 담당하고 있으며, 아예 쿠데타를 일으켜 5대 패밀리에 들어가려는 계획을 세우고 있다.
  
  • 첼레스테 그리지오
    
  • 미키 그리지오
    
    
• 치스테르나 패밀리(Cisterna Family)/모나스테로 패밀리
  
  
• 포테로 패밀리(Pottero Family)/자카리아 패밀리
  

• 블랙 블러드 브라더후드
  

• 키메라 카르텔
  

(추가예정)

• 프로젝트가 대변경되면서 마피아에 관한 설명도 바뀌었다. 프라임 시티가 뉴올리언스를 배경으로 삼았던 것처럼 트와일라이트 시티 역시 어느 정도 뉴욕에 기반을 두고 있기 때문에, 마피아의 역사나 사건 역시 뉴욕과 비슷하게 흘러갈 것이다. 뉴올리언스 때에 비하면 자료가 많아서 다행이다.
  
• 작중 그리지오 패밀리와 그 조직원들의 모티브는 스틱맨 플래시 게임 시리즈인 "시프트 헤즈(Sift Heads)" 시리즈이다.
  
• 이탈리아 성씨 목록은 여기를 참고.